人教版生物选修三2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体课件

A细胞 B细胞 人工诱导 1.动物细胞融合的概念 杂交细胞 动物细胞融合（也称细胞杂 交）：是指两个或多个细胞融 合形成一个单核细胞的过程。 一、动物细胞融合 细胞膜的流动性 灭活病毒、PEG、电激等 融合后的细胞进行有丝分裂， 形成完整的杂交细胞 诱导的手段 融合后细胞的类型 AB杂种细胞遗传物质有什 么特点 三种AA、AB、BB（A、B） 含两种生物的遗传物质 2.动物细胞融合过程 原理 灭活：丧失感染性， 不破坏抗原结构 得到杂种细胞获得杂种植株 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振 动、电激） 化学（聚乙二醇） 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞膜的流动性细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原 理 融合的方法 诱导方法 结 果 3. 比较动、植物细胞杂交技术 4.动物细胞融合技术的意义和应用 二、单克隆抗体 1.什么是抗原？抗 体？ ２.抗体由什么细 胞产生？ ３.简述获得抗体 的传统途径？ 抗体的传统生产方法 抗原 反复注射动物 从动物的血清中 分离抗体 ★ 一个Ｂ淋巴细胞(浆 细胞)能分泌多种抗体 吗？ ★ 一种病原体侵入机 体之后，引起机体免 疫反应产生的抗体只 有一种吗？ 抗体的传统生产方法 抗原 反复注射动物 从动物的血清中分离抗体 该法制备抗体的缺点： 产量低、纯度低，且抗 体的特异性差、灵敏度 低。 １、单克隆抗体 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形 成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化 学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 单克隆抗体的制备 如何大量获得单克隆抗体？  提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？ 提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？ 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖 杂交瘤细胞 动物细胞培养技术 动物细胞融合技术单克隆 抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞 ２、设计思路： • 单克隆抗体：单个细胞克隆产生的化学性质单一、 特异性强的抗体 3.制备过程： 诱导其融合的方法有哪些？ 融合后培养液中有几类细胞 如何筛选出杂交瘤细胞，杂交 瘤细胞有何特点 注射抗原的目的是什么 为何要进行克隆化培养和专 一抗体检测，多次筛选 大量增殖杂交瘤细胞获得 单抗的方法 使小鼠产生相应的浆细胞 物理、化学、灭活的病毒 5类细胞 既可产生抗体，又可无限增殖 筛选出能产生单一抗体的 杂交瘤细胞,如何筛选？ 单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗 体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺 序是？ 3.单克隆抗体的应用 诊断试剂——最广泛应用 准确、高效、简易、快速 单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏 度高，并能大量制备。 “生物导弹” ＝单克隆抗体＋药物 单抗导向 主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗 癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。 【例1】科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融 合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单 克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.经过免疫的B淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴 细胞 B.不经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋 巴细胞 【例2】单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 （  ） A. B淋巴细胞   B．T淋巴细胞 C．骨髓瘤细胞 D．杂交瘤细胞 A D 【例3】用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下 列实验步骤中错误的是（ ） A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋 巴细胞 B．用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞 C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋 巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 D．筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的 细胞群，培养后提取单克隆抗体 B × 两个过程 动物细胞培养过程 单克隆抗体制备过程 三个“一” 一个诱导细胞融合的新方法 －－灭活病毒 一个新细胞－－杂交瘤细胞 一个优势－－单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势 （一选）选 择性培养基： 只有杂交瘤 细胞才能存 活 （二选）：选 能产生所需专 一抗体的杂交 瘤细胞 有限稀释法： 将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔 细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔 上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原 结合的培养孔为阳性孔。 再筛选出能产生特异性 抗体的细胞群。由于该细胞 群是由单个杂交瘤细胞克隆 来的，所以生产的抗体一定 是化学性质单一、特异性强 的单克隆抗体。 融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就 是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所 需抗体的细胞，通常用有限稀释法来选择 (1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠 体内的 细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之 前，应给小鼠注射_____________类物质。 （2）d过程是一个_____________过程，该过程的进 行常用_____________或_____________的诱导。 (3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 种 类型的C细胞，因此需用__________培养基筛选出D细 胞用于培养，D细胞的名称是 ，其特点 是_________________________________________。 3 杂交瘤细胞 (4)在培养时通过________分裂方式大量繁殖。D细 胞体外培养需要注意的条件是（要求答5项） __________________________________。 （5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面 ，与常规抗体相比，其特点是_________________。 15、（1）单克隆抗体是指 。 （2）制备单克隆抗体的步骤： ①将__________注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细 胞，其中至少1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。 ②将步骤①获得的B淋巴细胞与步骤②培养的骨髓瘤细胞 在_________________的诱导下融合。 ③将诱导后产生的多种细胞，放在_______培养基的多孔 培养板上培养，筛选。 ④这样获得的杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞_____________ 的能力，又具有________________的本领。 ⑤检测和分离带有抗X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放 一个细胞进行培养。 ⑥将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克 隆抗体。 产生专一抗体 （3）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种： ①体外培养法，可获得10μg/mL的抗体；②动物体内 诱生法可获得5~20mg/mL的抗体。你选择的方法及原 因是 。 （4）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因 为它是用小鼠的_______细胞制备的，其化学本质是 ___________，应用于人体，会作为 产 生 ，解决这个问题的方法是 _____________________________。 大量生产选①，小规模生产选② 效应B 蛋白质 异物 免疫反应 采用人的效应B细胞制备 15、右图为某同学根据杂交瘤技术 的方法，设计的生产破伤风杆菌抗 体的实验方案。据图回答：   （1）该方案能达到预期效果吗 ？   。原因是     _______________________________ _______________。   （2）图中②为    过程 ，常用     作为诱导剂。该 细胞继承了_____________________    ，因此不仅能分泌  ___________ ，还有     本领。大量增殖 制备单克隆抗体（3）该方案的目的是_________________________。